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Relationship between Microscopic Agglutination Test and Real-Time PCR Assay for Detection of Seropositivity of Pathogenic Leptospira Infections in Cattle in Chile: A Pilot Study

智利牛群钩端螺旋体病诊断研究揭示MAT与PCR检测互补价值

作者：Paz Loebel , Lucía Azócar-Aedo , Alfredo Rodríguez , María Gallardo

近期，智利圣塞巴斯蒂安大学Paz Loebel与Lucia Azócar-Aedo团队在Zoonoses发表短篇通讯研究《Relationship between Microscopic Agglutination Test and Real-Time PCR Assay for Detection of Seropositivity of Pathogenic Leptospira Infections in Cattle in Chile: A Pilot Study》。该研究对智利南部洛斯·拉戈斯大区61头奶牛开展平行检测，首次量化显微镜凝集试验（MAT）与实时荧光定量PCR（靶向lipL32基因）的互补关系：75%阳性样本被两种方法共同检出，PCR相对MAT的灵敏度达75%（95%CI:57.7-92.3），特异度100%，kappa系数0.784（95%CI:0.626-0.943）表明高度一致性。

诊断效能对比

研究在未接种钩端螺旋体疫苗的2-10岁荷斯坦/娟姗奶牛中开展。MAT检测显示：

· 血清阳性率39.3%

（24/61，95%CI:27.0-51.5），检出的主要血清群为塔拉索维（Tarassovi，52.2%）和塞若群（Sejroe，41.7%）

· 抗体滴度分布：1:800与1:200占33.3%，1:400占25.0%，1:1600占8.3%（各组间比例差异无统计学意义，p>0.05）

实时荧光定量PCR检测尿液显示：

· 病原阳性率

29.5%（18/61，95%CI:18.0-40.9）

· 细菌载量跨度较大：1.07-12500钩体/毫升尿液

交叉验证发现：24头MAT阳性牛中18头PCR阳性（符合率75%），6头仅MAT阳性；37头双阴性牛中未发现PCR阳性样本。PCR阳性预测值达100%，阴性预测值86.7%（95%CI:75.7-96.4），意味着PCR阴性结果时，仍有13.3%的个体可能实际被感染（假阴性）。

流行病学意义

MAT检测的高抗体滴度（≥1:400占66.6%）提示活跃感染。尽管所有牛均无临床症状，但塞若群（含Hardjo血清型）作为牛适应性血清群，常导致隐性感染，而塔拉索维群可能源于野猪或野生动物传播。该结果与南美流行特征一致：巴西牛群塞若群阳性率49.3%，墨西哥塔拉索维群检出率显著。

PCR检测的病原排泄量差异（最高达万倍）具有重要公共卫生意义：即使低载量排泄（1.07钩体/毫升），因牛每日排尿量达10-20升，仍可造成显著环境污染。而智利此前研究曾报告更高排泄量（30,000-44,000钩体/毫升），表明区域流行株可能存在毒力差异。

临床诊断策略优化

研究强调两种方法的互补性：

1. MAT优势：确定血清群（指导疫苗选择）、评估感染阶段（高滴度提示活动性感染）

2. PCR优势：

早期诊断（抗体产生前）、量化环境传染源、确认肾脏定植

现行智利牛用疫苗包含针对Hardjo、Pomona等5种血清型的抗原。然而，由于钩端螺旋体不同血清型之间免疫保护缺乏交叉性，因此准确鉴定流行血清型对于选择匹配的疫苗进行有效防控至关重要。对于出现繁殖障碍（流产、死胎）的牛场，

建议：

·急性期首选PCR检测血液/组织

·慢性期或康复期采用MAT+尿液PCR

·监测计划中联合使用可提升群体诊断准确性

局限与展望

样本量较小（n=61）可能影响统计效力，且未开展病原分离确认血清型。未来需扩大采样范围，尤其智利南部奶牛主产区（占全国产量32%），并追踪抗体滴度与病原排泄动态。建议探索MAT/PCR双阳性牛的肾脏病理变化，为"携带者"管理提供依据。

感谢东部战区疾控中心齐永博士对这篇中文述评的校对。

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引用信息

Citation:

Loebel P, Azócar-Aedo L, Rodríguez A, Gallardo M. Relationship between microscopic agglutination test and real-time PCR assay for detection of seropositivity of pathogenic Leptospira infections in cattle in Chile: A pilot study. Zoonoses. 2024; 5(1): 17. DOI: 10.15212/ZOONOSES-2025-0003